КОРДИЦЕПС-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ

Введение.

Микроскопические грибки рода Кордицепс (Cordyceps) относятся к классу Аскомицеты, или Сумчатые грибы (Ascomycetes), который является наиболее многочисленным и включает до 30000 видов.

Представители этого класса характеризуются наличием хорошо разветвленного мицелия с перегородками. В результате полового процесса у типичных представителей из зиготы образуется аскогенные гифы, на которых возникают сумки.

Сумка- это репродуктивный орган; в ней образуется споры, с помощью которых происходит дальнейшее размножение особи. Споры распространяются токами воздуха, каплями дождя, при помощи насекомых.

На определенном этапе развития (конидиальная стадия) некоторые виды сумчатых грибов родов Hypomyces. Cordyceps паразитируют на плодовых телах базидиальных, реже сумчатых грибов, а в зимнем периоде в коконе некоторых насекомых.

Кордицепс китайский (латинское название (Cordyceps chinensis) обитает условиях высокогорья на высоте 3500м в Тибете в провинции Сычуань. Юньнань, Цинхай. Тело этого гриба богато питательными веществами и специфическими биологически активными компонентами.

Биологически активная добавка “Кордицепс” фирмы “Тяньши” изготовлена из мицелия гриба - натурального Кордицепса китайского с использованием современной биотехнологии сепарирования. После культивирования полученную биомассу сублимируют, измельчают и порошок упаковывают в желатиновые капсулы.

Цель исследования.

Целью данного исследования являлось определение микробиологической чистоты и антимикробных свойств биологически активной добавки фирмы “Тяньши” - “Кордицепс”.

Материалы и методы.

Биологически активная добавка “Кордицепс” фирмы “Тяньши” изготовленная по стандарту Q\12WQ3724-1999 и с сертификатом Российской Федерации 000867.И.156.04.99.

Для изучения органолептических свойств содержимое капсулы высыпали в стерильную чашку Петри. Препарат представляет собой гомогенный порошок коричневого цвета со специфическим запахом мускатного ореха, какао или жареной муки, что вероятно связано с добавкой аденозина.

Затем содержимое капсулы растворили в стерильном физиологическом растворе 1:10 и приготовили препарат раздавленной капли. Изучение препарата в микроскопе с фазовым контрастом выявило фрагменты нитей мицелия и мелкие круглые споры.

В соответствии со статьей ГосФармакопеи 11 издания "Методы микробиологического контроля лекарственных средств" и ее изменениями от 1.06.1996 применяли глубинный посев в питательном агаре для определения микробного числа (допускаемый норматив менее 1000 микробных тел в 1г препарата) жидкую среду Сабуро (допускаемый норматив менее 100 микробных тел в 1г препарат) в пробирках по 10 мл, в пептонную воду для выявления Escherichia coli с последующим пересевом на среду Эндо или Левина, на солевой бульон для определения стафилококков, и в цетримидную среду для определения Псевдомонад. Параллельно делали посев на плотную среду мясо-пептонного питательного агара и на кровяном агаре в чашках Петри. Испытуемую суспензию порошка кордицепса из разведении от 10 ^-1 и до 10^-5 вносили по 1 мл в пробирках с жидкими средами средами и по 0,1 мл растирали шпателем в чашках с плотными средами. Посевы во всех средах инкубировали при 35 градусов в течение 48 часов, а на среде Сабуро при 20 -25 градусов в течение 72 часов.

Для определения антимикробных свойств Кордицепса 10% суспензию пропустили через нитроцеллюлозные мембранные Nr. 1 для удаления микроорганизмов и других взвешенных частиц и далее добавили по 1 мл в пробирках с 4 мл расплавленного и охлажденного до температуры 45-50 С питательного агара. В другие пробирки со средой вносят по 1 мл того же физиологического буферного раствора (контроль). Затем все пробирки контаминируют 0,1 мл взвесью тест - микроорганизма, с концентрацией 10 единиц по стандарту мутности. Путем вращения быстро перемешивают содержимое каждой пробирки и выливают в чашку Петри с 15-20 мл соответствующей питательной среды предварительно разлитой и подсушенной. Быстрым покачиванием чашки равномерно распределяют верхний слой агара и дают ему застыть. После застывания чашки переворачивают и инкубируют при температуре 35 С в течение 24 часа (питательный агар или среда АГВ) и при 20 С в 72 часа (среда Сабуро). Нами использованы следующие тест-культуры на питательном агаре кишечная палочка (Escherichia coli), стафилококк золотистый (Staphylococcus aureus) и сине-гнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa). На среде Сабуро тестировали дрожжеподобные грибки рода Кандида (Candida albicans).

Результаты и обсуждение.

Макроскопически и органолептически Кордицепс представляет собой гомогенный порошок коричневого цвета с характерным запахом мускатного ореха.

Микроскопически при увеличении в 1350 раз (90х10х1,5) выявлены короткие 10-30 микрон нити мицелия и споры гриба как отдельно расположенные так и в виде скоплений различной формы.

При исследовании обсемененности препарата было установлено отсутствие микрофлоры во всех пробах в течение указанных сроков, что свидетельствует о самой высокой степени микробиологической чистоты Кордицепса и его абсолютной безопасности для человека.

Определение антимикробных свойств показало, что по истечении указанных сроков инкубации при сравнении с контролем в посевах с препаратом Кордицепс нами установлено полное подавление роста всех тест-культур, что позволяет сделать заключение о наличии антимикробного действия исследуемого лекарственного средства в отношении указанных микроорганизмов. Однако с целью уточнения степени антимикробного действия необходимо как испытание более высоких разведении (1:100, 1:1000, 1:10000), так и расширение спектра тест-культур включая хамидии и вирусы, а также испытание действия Кордицепса на ассоциации микроорганизмов в том числе на такие специфические биоценозы которые образуются при дисбактериозах кишечника как у взрослых так и у детей.

Заключение.

Проведенные исследования указывают на ценные качества данной биологически активной добавки как микробиологическая чистота так и наличие антимикробных свойств. Изложенные данные могут служить основой для сертификации Кордицепса в Республике Молдова.